Otevřít hlavní menu
Chemická struktura Hoechstových barviv

Hoechstova barviva tvoří skupinu modrých fluorescenčních barviv, která se vážou DNA.[1][2] Jsou to bisbenzimidy pojmenované podle firmy Hoechst AG, která je vyvinula. Skupinu tvoří tři strukturně podobná barviva Hoechst 33258, Hoechst 33342 a Hoechst 34580. Nejčastěji používaná jsou barviva Hoechst 33258 a Hoechst 33342, která mají velmi podobná excitační a emisní spektra.

Molekulární vlastnostiEditovat

 
Emisní a excitační spektra Hoechstových barviv.

Barviva Hoechst 33258 a Hoechst 33342 mají excitační maximum okolo 350 nm v ultrafialové části spektra a emisní maximum 461  nm v tyrkysové oblasti. Nenavázané barvivo emituje v rozmezí 510–540 nm. Intenzita fluorescence stoupá s pH rozpouštědla.[3]

Hoechstova barviva jsou rozpustná ve vodě a organických rozpouštědlech, jako jsou DMSO a DMFA. Koncentrace může dosáhnout až 10 mg/ml. Vodný roztok je při teplotě 2-6 °C stabilní více než půl roku, je však třeba jej chránit před světlem. Pro dlouhodobé uskladnění je vhodné roztoky zamrazit.

Hoechstova barviva se vážou do malého žlábku dvoušroubovice DNA zejména do míst bohatých na adenin a thymin. V případě vazby na jiné nukleové kyseliny je intenzita fluorescence výrazně nižší.[4]

ReferenceEditovat

V tomto článku byl použit překlad textu z článku Hoechst stain na anglické Wikipedii.

  1. LATT, SA; STETTEN, G; JUERGENS, LA; WILLARD, HF; SCHER, CD. Recent developments in the detection of deoxyribonucleic acid synthesis by 33258 Hoechst fluorescence.. The journal of histochemistry and cytochemistry : official journal of the Histochemistry Society. July 1975, s. 493–505. DOI:10.1177/23.7.1095650. PMID 1095650. (anglicky) 
  2. LATT, SA; STETTEN, G. Spectral studies on 33258 Hoechst and related bisbenzimidazole dyes useful for fluorescent detection of deoxyribonucleic acid synthesis. The journal of histochemistry and cytochemistry : official journal of the Histochemistry Society. January 1976, s. 24–33. DOI:10.1177/24.1.943439. PMID 943439. (anglicky) 
  3. Hoechst Stains [online]. Invitrogren (Molecular Probes) [cit. 2015-09-25]. Dostupné v archivu pořízeném z originálu dne 19-04-2009. (anglicky) 
  4. PORTUGAL, J; WARING, MJ. Assignment of DNA binding sites for 4',6-diamidine-2-phenylindole and bisbenzimide (Hoechst 33258). A comparative footprinting study. Biochimica et Biophysica Acta. Feb 28, 1988, s. 158–68. DOI:10.1016/0167-4781(88)90079-6. PMID 2449244. (anglicky)