Buněčná linie THP-1
THP-1 je monocytární lidská buněčná linie získaná z krve pacienta trpícího akutní leukemií.[1] Tyto buňky se morfologickými a funkčními vlastnostmi podobají primárním monocytům a makrofágům, včetně markerů diferenciace. Využívají se tedy jako modelový systém ke studiu imunitní odpovědi a funkce, aktivity, mechanismů a signálních drah monocytů/makrofágů.[2]
Charakteristika editovat
Monocytární THP-1 jsou samostatné kulaté buňky vyskytující se v suspenzi. Po diferenciaci se stávají adherentními a fenotypově se podobají makrofágům: plochý nepravidelný tvar, dobře vyvinutý Golgiho aparát a drsné endoplazmatické retikulum, velký počet volných ribozomů v cytoplazmě.[3] THP-1 buňky mají fagocytární fyziologii (jak pro latexové kuličky, tak pro senzibilizované erytrocyty).[4]
Kultivace editovat
Vhodné podmínky pro kultivaci jsou 37 °C, atmosféra 5% CO2.[4] Základním kultivačním médiem je pro tuto buněčnou linii médium RPMI-1640 doplněné o fetální hovězí albumin (BSA) a 2-merkaptoethanol.[4] Průměrná doba zdvojení THP-1 monocytů se pohybuje v rozmezí 35-50 hodin.[2] Tuto imortalizovanou buněčnou linii lze kultivovat in vitro až do 25 pasáže (cca 3 měsíce) beze změn buněčné citlivosti a aktivity.[2] THP-1 buňky lze zmražené skladovat řadu let a podle vhodného protokolu lze tuto buněčnou linii obnovit bez zjevných změn vlastností a životaschopnosti buněk.[2]
Diferenciace THP-1 makrofágů editovat
Monocytární buňky THP-1 mohou diferencovat v buňky fenotypově podobné makrofágům za použití forbol-12-myristát-13-acetátu (PMA), 1,25-dihydroxyvitaminu D3 (vD3) nebo faktoru stimulujícího kolonie makrofágů (M-CSF).[2] Pro kontrolu plné diferenciace je třeba sledovat adhezi buněk, fagocytární kapacitu a expresi povrchových markerů diferenciace jako jsou CD-14, CD36, TLR-2 a CR3 (CD11b/CD18).[2]
Rizika editovat
Z hlediska biologické bezpečnosti spadá tato buněčná linie dle doporučení ATCC (Americká sbírka typových buněčných kultur) do kategorie Biosafety Level 1.[4] Nejsou hlášeny žádné důkazy o přítomnosti infekčních virů nebo toxických produktů v buňkách THP-1, což činí tuto buněčnou linii relativně bezpečnou a snadnou pro manipulaci.[2]
Aplikace editovat
Buněčná linie THP-1 je vhodným, zjednodušeným a spolehlivým modelem pro in vitro studium aktivity a funkce primárních monocytů a makrofágů, diferenciace makrofágů a účinků podnětů z okolního prostředí.[2]
Mohou být prováděny genetické modifikace THP-1 buněk malými interferujícími RNA (siRNA) za účelem snížení regulace exprese specifické bílkoviny.[3]
THP-1 buňky jsou vhodné pro DNA microarray analýzu, jelikož lze použít velké množství buněk s homogenním genetickým pozadím.[3]
Tato buněčná linie byla také použita ke studiu produkce makrofágových cytokinů a peptidových hormonů.[5]
U THP-1 makrofágů byla zkoumána tvorba dvou proteinů podílejících se na metabolismu lipidů, tj. enzymu lipoproteinové lipázy (LPL) a proteinu vázajícího lipidy apo E.[5]
Tato linie bývá využívána jako model pro zkoumání některých fyziologických procesů souvisejících s makrofágy, například efluxu cholesterolu makrofágy.[6]
Odkazy editovat
Reference editovat
- ↑ TSUCHIYA, Shigeru; YAMABE, Michiko; YAMAGUCHI, Yoshiko. Establishment and characterization of a human acute monocytic leukemia cell line (THP-1). International Journal of Cancer. 1980-08-15, roč. 26, čís. 2, s. 171–176. Dostupné online [cit. 2022-05-04]. DOI 10.1002/ijc.2910260208. (anglicky)
- ↑ a b c d e f g h CHANPUT, Wasaporn; MES, Jurriaan J.; WICHERS, Harry J. THP-1 cell line: An in vitro cell model for immune modulation approach. International Immunopharmacology. 2014-11, roč. 23, čís. 1, s. 37–45. Dostupné online [cit. 2022-05-04]. DOI 10.1016/j.intimp.2014.08.002. (anglicky)
- ↑ a b c ZHENYU, Qin. The use of THP-1 cells as a model for mimicking the function and regulation of monocytes and macrophages in the vasculature. Atherosclerosis. 2012-03, roč. 221, čís. 1, s. 2–11. Dostupné online [cit. 2022-05-05]. DOI 10.1016/j.atherosclerosis.2011.09.003. (anglicky)
- ↑ a b c d ATCC: THP-1 [online]. [cit. 2022-05-05]. Dostupné online.
- ↑ a b AUWERX, J. The human leukemia cell line, THP-1: A multifacetted model for the study of monocyte-macrophage differentiation. Experientia. 1991-01, roč. 47, čís. 1, s. 22–31. Dostupné online [cit. 2022-05-12]. ISSN 0014-4754. DOI 10.1007/BF02041244. (anglicky)
- ↑ WANG, Dongdong; HIEBL, Verena; LADURNER, Angela. 6-Dihydroparadol, a Ginger Constituent, Enhances Cholesterol Efflux from THP-1-Derived Macrophages. Molecular Nutrition & Food Research. 2018-07, roč. 62, čís. 14, s. 1800011. Dostupné online [cit. 2022-05-12]. DOI 10.1002/mnfr.201800011. PMID 29802792. (anglicky)