Avidin-peroxidáza: Porovnání verzí
Smazaný obsah Přidaný obsah
m Náhrada Biotin.svg -> Biotin2.svg (Leyo: almost exact duplicate, but without SVG bug) |
upravy formatu |
||
Řádek 1:
[[File:GlutPeroxidase-1GP1.png|thumb|Peroxidáza je enzym, tzn. patří mezi proteiny; zde znázorněna [[glutathion peroxidáza]]]]
'''Avidin-peroxidáza''' (též '''avidin-peroxidasa''') je modifikovaná [[peroxidáza]] (nejčastěji získávaná z [[křen selský|křenu selského]], ''Armoracia rusticana''), na kterou je kovalentně připojen protein [[avidin]] (z [[vaječný bílek|vaječného bílku]]).
== Použití ==
Avidin-peroxidasa se velmi často používá v laboratoři k vizualizaci různých biochemických interakcí (protein-proteinových, protein-sacharidových, …), kde jeden z účastníků této interakce je modifikován [[biotin]]em. Avidin je schopen specificky a velmi silně vázat biotin a přes tzv. avidin-biotinový můstek připojit peroxidasu k interagujícím látkám. Peroxidasa pak po dodání zdroje peroxidu (H<sub>2</sub>O<sub>2</sub>,NaBO<sub>3</sub>, ...) a vhodného substrátu, který oxiduje a změní jeho vlastnosti (barva, rozpustnost) vizualizuje tuto interakci. Příkladem můžou být [[4-chloro-1-naftol]] - po oxidaci dochází ke vzniku nerozpustné fialové látky a [[ABTS]] (2,2'-azino-bis(3-ethylbenzthiazolin-6-sulfonát), který tvoří stabilní, zeleně zbarvené rozpustné radikály.▼
[[File:HeLa cell endocytic pathway labeled for EGFR and transferrin.jpg|thumb|Mikrofotografie lidských [[HeLa]] buněk; tmavé skvrny znázorňují místa, kde se vyskytuje v buňce protein [[transferin]], a to právě pomocí vazby křenové peroxidázy na bílkovinu transferin]]
Avidin-peroxidáza se velmi často používá v laboratoři k vizualizaci různých biochemických interakcí (protein-proteinových, protein-[[sacharid]]ových, …), u nichž jeden z účastníků této interakce je modifikován [[biotin]]em. Avidin je schopen se specificky a velmi silně vázat na biotin a přes tzv. avidin-biotinový můstek je tedy schopen připojit peroxidasu k interagujícím látkám.
▲
[[Image:ABTS.png|thumb|vzorec ABTS]]
== Stavební částice ==
===Křenová peroxidáza===
{| class=wikitable
! colspan=
|-
| alternativní názvy
Řádek 24 ⟶ 30:
| 7<ref>Shannon, L.M., et al., J. Biol. Chem., 241, 2166–2172 (1966).</ref>
|-
| [[izoelektrický bod|pI]]
| 3-9
|-
Řádek 35 ⟶ 41:
|}
=== Avidin===▼
▲== Avidin==
[[image:Biotin2.svg|thumb|biotin]]
{| class=wikitable
! colspan=
|-
| zdroj
Řádek 51 ⟶ 53:
| homotetramer, celková Mr = 66-69 000
|-
| [[izoelektrický bod|pI]]
| 10,5
|-
Řádek 61 ⟶ 63:
Podobně jako avidin se používá i [[streptavidin]] - [[protein]] o podobných vlastnostech jako [[avidin]] (silná a specifická vazba [[biotin]]u) izolovaný z ''Streptomyces avidinii''. Narozdíl od avidinu není streptavidin vůbec [[glykoprotein|glykosylován]].
==
Křenová peroxidáza je [[kovalentní vazba|kovalentně]] připojena na avidin pomocí [[bismaleimid]]u (dimaleimidu) v poměru přibližně 2:1 (HRP:avidin)<ref>O'Sullivan MJ, et al, FEBS letters, 35, 311-313 (1978).</ref>▼
==používané substráty avidin peroxidázy==▼
{| class="wikitable"
|-
|zkratka
Řádek 75 ⟶ 72:
|-
|DAB
|[[3,3'diaminobezidin]]
|N
|-
|4-CN
|[[4-chloro-1-naftol]]
|N
|-
|HYR
|[[Hanker-Yaks reagent]]
|N
|-
|AEC
|[[3-amino-9-ethylethanol]]
|N
|-
|[[TMB]]
| -
|R
|-
|OPD
|[[o-fenylendiamin]]
|R
|-
|ABTS
|[[2,2'-azino-bis(3-ethylbenzthiazolin-6-sulfonát]]
|R
|}
==Související články==▼
▲Křenová peroxidáza je [[kovalentní vazba|kovalentně]] připojena na avidin pomocí [[bismaleimid]]u (dimaleimidu) v poměru přibližně 2:1 (HRP:avidin)<ref>O'Sullivan MJ, et al, FEBS letters, 35, 311-313 (1978).</ref>
== Odkazy ==
===Reference===▼
<references/>▼
▲===Související články===
* [[ELISA]]
Řádek 109 ⟶ 114:
* [[peroxidázy]]
* [[mikrotitrační destička]]
▲==Reference==
▲<references/>
[[Kategorie:Oxidoreduktázy]]
| |||