Otevřít hlavní menu

Změny

Odebráno 7 bajtů ,  před 5 měsíci
m
Robot: -prázdný parametr alt; kosmetické úpravy
'''Western blot''' (v české literatuře též označovaný jako '''imunoblot''') je analytická technika používaná k detekci specifického [[Bílkovina|proteinu]] ve směsi s dalšími proteiny, např. ve vzorku homogenátu [[tkáň|tkáně]] či jiného biologického vzorku. Využívá gelovou [[elektroforéza|elektroforézu]] k separaci proteinů podle jejich velikosti (denaturující [[SDS-PAGE]]), popř. podle jejich celkové trojrozměrné struktury (nativní elektroforéza). Následně jsou proteiny přeneseny („přeblotovány“) z gelu na povrch membrány (nejčastěji [[nitrocelulosa|nitrocelulosové]] či [[PVDF]]), na jejímž povrchu jsou detekovány specifickými [[protilátka]]mi.
 
Touto metodou se v praxi diagnostikuje řada infekčních onemocnění člověka a zvířat. Oproti běžným [[sérologie|sérologickým metodám]] jako je [[ELISA]], je Western Blot sice časově náročnější a dražší, ale zato přesnější (větší specifičnost).
 
Metoda dostala své jméno ''Western blot'' jako slovní hříčka na podobnou metodu [[Southern blot]] používanou k detekci [[DNA]] a vyvinutou dříve Edwinem Southernem.
* '''chemiluminiscenční způsob:''' reportérový enzym (peroxidáza) přeměňuje [[chemiluminiscence|chemilumiscenční]] substrát na nestabilní produkt, který se stabilizuje vyzářením kvanta světla. Množství světla je poté úměrné množství peroxidázy, které je přímo úměrné množství daného proteinů. Uvolňované světlo je pak detekováno buď přiložením světlocitlivého filmu, anebo nověji použitím [[Charge-coupled device|CCD]]-kamer. Pro kvantifikaci je opět možné použít [[densitometrie|densitometrii]].
 
[[Soubor:Western Blot results for HIV test.jpg|náhled|Výsledky western blotu u pacienta testovaného na HIV.|alt=|320x320pixelů]]
== Výhody a nevýhody Western blotu ==
* '''výhoda:''' oproti detekci proteinů barvením gelu stříbrem je možné poměrně jednoduše, rychle a jednoznačně detekovat jeden protein i ve složité směsi proteinů
* Ferenčík M., Škárka B., a kol. Biochemické laboratórne metódy. Vydavateľstvo technickej a ekonomickej literatúry, Bratislava, 1984.
* Tijssen P. Practice and Theory of Enzyme Immunoassays. Elsevier, Amsterdam, 1985.
* Tizard I.R. Veterinary Immunology - an introduction. Saunders co., Philadelphia, 1996.
* Toman M. a kol. Veterinární imunologie. Grada Publishing, Praha, 2000.
 
311 623

editací