Otevřít hlavní menu

Změny

Přidáno 3 253 bajtů ,  před 1 rokem
základní popis, účel techniky a postup + zdroje včetně přesného návodu
[[Soubor:Northern_blot_diagram.png|náhled|Schéma průběhu nothern blotu od získání vzorku po označení hledaných RNA segmentů.]]
Nothern blot je laboratorní postup sloužící k nalezení, měření délky a množství [[RNA]] [[Transkript|transkriptů]] zájmového [[Gen|genu]] ve směsi různých RNA molekul.<ref name=":0">{{Citace periodika
| příjmení = Klionsky
| jméno = Daniel J.
| titul = Blame it on Southern, but it's a western blot
| periodikum = Autophagy
| datum = 2016-11-28
| ročník = 13
| číslo = 1
| strany = 1–2
| issn = 1554-8627
| pmid = 27893304
| doi = 10.1080/15548627.2016.1255382
| poznámka = PMID: 27893304
PMCID: PMC5240824
| url = https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5240824/
| datum přístupu = 2018-09-10
}}</ref><ref name=":1">{{Citace elektronického periodika
| titul = Northern blot {{!}} Learn Science at Scitable
| periodikum = www.nature.com
| url = https://www.nature.com/scitable/definition/northern-blot-287
| jazyk = en
| datum přístupu = 2018-09-10
}}</ref> Využívá se ke zjišťování míry [[Exprese genu|exprese]] jednotlivých genů u organismů, jejich tkání či samotných buněk. To umožňuje například identifikaci genů zodpovědných za některá onemocnění či detailní výzkum průběhu embryonálního vývoje živočichů.<ref>{{Citace periodika
| titul = Southern, Northern, Western, and Eastern blots
| periodikum = AAAS - The World's Largest General Scientific Society
| datum = 2016-06-10
| jazyk = en
| url = https://www.aaas.org/blog/scientia/southern-northern-western-and-eastern-blots
| datum přístupu = 2018-09-10
}}</ref> Jméno získal díky své podobnosti s technikou [[Southernův přenos|Southern blot]] (pojmenovaná podle jejího vynálezce profesora [[Edwin Southern|Edwina Southerna]]).<ref name=":0" />

== Postup ==
Nejprve se vzorek RNA [[Denaturace|denaturuje]] a rozdělí podle délky za pomocí nanesení na [[agarózový gel]], kde proběhne tzv. [[gelová elektroforéza]]. Poté je přenesen na nylonovou membránu a na ní zafixován. (Podle tohoto kroku je technika pojmenovaná blot nebo blotting. Jde o anglický termín užívaný pro vysoušení povrchu za pomoci absorbčního materiálu.) Za využití označené próby se dále provádí [[hybridizace]] s RNA, tzn. nanesení komplementární [[DNA]] nebo RNA k hledané sekvenci. Na pevné membráně tak dojde k vazbě hledaných kusů RNA s komplementární próbou, která je poté obvykle dobře detekovatelná díky svému označení radioaktivními atomy nebo fluorescenčním barvivem. Pak je již možné vyhodnotit přítomnost hledaných segmentů RNA.<ref name=":1" /><ref>{{Citace periodika
| příjmení = He
| jméno = Shan L.
| titul = Northern blot
| periodikum = Methods in enzymology
| datum = 2013
| ročník = 530
| strany = 75–87
| issn = 0076-6879
| pmid = 24034315
| doi = 10.1016/B978-0-12-420037-1.00003-8
| poznámka = PMID: 24034315
PMCID: PMC4287216
| url = https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4287216/
| datum přístupu = 2018-09-10
}}</ref>

Později byla objevena i technika takzvaného reverzního nothern blotu, který umožňuje za pomoci RNA próby označit hledané segmenty DNA.<ref name=":0" />

== Zdroje ==