Barvení (biologie)
technika označování objektů pozorovaných pod mikroskopem
(přesměrováno z Bakteriologické barvení)
Barvení je biochemická metoda, kterou se přidá k substrátu specifická barvící látka (barvivo) a slouží v biologii na prokázání výskytu (kvalifikaci) nebo množství (kvantifikaci) specifické látky ve zkoumané tkáni nebo v pletivu, nebo k obarvení celých struktur a objektů, které zlepšuje nebo umožňuje jejich pozorování optickým mikroskopem.
Užívaná barviva editovat
abecedně:
- bismarckova hněď
- karmín – barví jádra červeně, extrakt ze samiček červce nopálového (Coccus cacti), nepřebarvuje, dříve využíván v embryologických studiích pro barvení celých bloků tkání.
- Coomassie
- DAPI
- eosin
- Erie garnet = direct red 10
- etidium bromid
- fenolová červeň
- hematoxylin
- Hoechstovo barvivo
- jód
- jádrová červeň „Kerlechtrot“ – barví jádra červeně, v roztoku síranu hlinitého
- Kongo červeň = Congo red = direct red 28 – barví amyloid červeně
- krystalová violeť
- kyselina pikrová (2,4,6-trinitrofenol) – barví cytoplazmu buněk a svaly žlutě
- kyselý fuchsin – kolagenní vlákna červeně
- Luciferová žluť – fluorescenční barvivo
- malachitová zeleň
- methylová zeleň
- methylová modř
- neutrální červeň
- nilská modř
- nilská červeň = Nile blue oxazone – barví tukové kapénky červeně
- olejová červeň = oil red O – barví tuk červeně
- rhodamin
- safranin
- saturnová červeň (sirius red F3B, direct red 80, F3B 200, C. I. No. 35780, CAS No. 2610-10-8) – azobarvivo, kolagenní vlákna barví červeně, případně barvení amyloidu
- irius red 4B = direct red 79 = L4B 200 – azobarvivo
- šafrán – barví kolagen, extrakt z blizen šafránu setého
- Weigertův železitý hematoxylin = Weigert's Iron Hematoxylin – barví chromatin v jádrech šedě nebo temně hnědě (modročerně až hnědočerně)
Barvicí metody editovat
Existuje mnoho detailně rozpracovaných barvících metod, z nejvýznamnějších je možné uvést:
Barvení mukopolysacharidů editovat
Mukopolysacharidy se barví směsí PAS, alciánové modři a hematoxylinu, a to tímto postupem:
- odparafínování: xylen 1 (5 min.), xylen 2 (5 min.), alkohol 1 (5 min.), alkohol 2 (5 min.), oplach v destilce
- kyselina jodistá 0,5 % 5 minut
- praní vodou 2–3 min, oplach destilovanou vodou
- Schiffovo reagens 20–30 min
- tekoucí voda 10 min., oplach destilovanou vodou
- alciánová modř (před použitím se doporučuje přefiltrovat) 1-2 hod.
- oplach vodou
- hematoxylin 5 min.
- praní 20 min., oplach destilovanou vodou, oplach absolutním alkoholem, xylen 3 (5 min.), xylen 4 (5 min.), montování
Výsledek:
- neutrální mukopolysacharidy a glykogen – červeně
- kyselé mukopolysacharidy – modrozeleně
- jádra – modře hematoxylinem
Barvení kolagenních vláken editovat
Kolagenní vlákna je možné barvit za použití saturnové červeni a Weigertova železitého hematoxylinu:
- odparafínování: xylen 1 (5 min.), xylen 2 (5 min.), alkohol 1 (5 min.), alkohol 2 (5 min.)
- důkladně proprat ve vodě
- Weigertův železitý hematoxylin (roztok A + roztok B 1 : 1) 5 min. nebo gallocyanin 24 hod.
- praní v tekoucí vodě 5–10 min.
- saturnová červeň 1–20 min. (10 ml 1 % roztoku saturnové červeně + 90 ml nasyceného roztoku kys. pikrové)
- několikrát oplach v absolutním alkoholu, xylen 3, xylen 4, montování
Výsledek:
- kolagenní vlákna – červeně
- svalovina – žlutě (pouze pokud je v saturnové červeni také kyselina pikrová)
- jádra – hematoxylinem
Barvení elastických vláken editovat
(orcein + hematoxylin)
- odparafínování: xylen 1 (5 min.), xylen 2 (5 min.), alkohol 1 (5 min.), alkohol 2 (5 min.), oplach v destilované vodě
- orcein 6-8 hod. při teplotě 38-40 °C
- oplach destilovanou vodou
- oplach kyselým alkoholem 70 %
- praní ve vodě
- hematoxylin 5 min.
- praní 20 min., oplach destilovanou vodou, oplach absolutním alkoholem, xylen 3, xylen 4, montování
Výsledek:
- elastická vlákna – červenohnědě (elastické vazivo (žluté vazy obratlů, vazy hrtanu), elastická chrupavka (ušní boltec, epiglottis))
Giemsovo barvení editovat
Podrobnější informace naleznete v článku Giemsovo barvení.
Gramovo barvení editovat
Podrobnější informace naleznete v článku Gramovo barvení.
Základní barvící metoda v mikrobiologii. Barvíme fixovaný preparát.
- krystalová violeť na 20s – oplach ve vodě
- Lugolův roztok na 20s – oplach ve vodě
- aceton – odbarvení (dokud odtéká barva z preparátu)
- Karbolfuchsin na 20s – oplach ve vodě.
Externí odkazy editovat
Obrázky, zvuky či videa k tématu barvení na Wikimedia Commons
Metody:
- Metody histologického studia (PDF dokument)
- Odběr materiálu pro histologické vyšetření Archivováno 30. 5. 2020 na Wayback Machine. (textový dokument DOC)
Barviva:
- přehled barviv (anglicky)
